尊龙凯时 最新研究显示,支原体(Mycoplasma)是目前已知最小、最简单的无细胞壁的原核生物,直径在0.1到0.3微米之间,能够通过滤膜且呈现出高度多形性。在哺乳动物细胞培养中,支原体污染是一种相对普遍且难以检测的隐患。因其可形成丝状和分枝形状,故被称为支原体。
在细菌分类中,支原体属于柔膜菌门、柔膜菌纲,并细分为不同的目、科、属。特别关注的支原体目和支原体科,主要包括支原体属和脲原体属。近年来,支原体污染对细胞培养造成的多重侵犯已经成为一个严重问题,通常在细胞培养中估算支原体的污染率为15%至35%,这对实验结果的可信度产生了显著干扰。
细胞培养中的95%支原体污染主要源于莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体等。支原体在培养基上形成的菌落常呈现“煎鸡蛋”效果。此外,细胞培养上清和细胞膜为支原体的生长提供了良好的环境,使其能够轻松透过宿主细胞膜。
支原体污染的来源主要包括:细胞培养液或其成分(如原料培养基、血清等)、实验室操作人员、细胞培养箱、以及空气中的颗粒和气溶胶。过度使用抗生素、密封不良的细胞培植和污染的细胞也都是污染源。
支原体污染的危害不容忽视,可能导致细胞产品在后续纯化过程中出现批次报废,甚至污染所有接触的设备和中间产品,让其他正常细胞也受到波及,影响重要细胞或病毒种子库的安全性,有时还迫使实验室停止运营,进行支原体去除。因此,定期进行支原体检测至关重要,以确保细胞培养体系的安全性,从而支持科学研究的正常进行。
支原体检测方法介绍
在生物制药和细胞研究领域,支原体污染是一个显著的挑战,影响实验结果及产品质量。为了确保细胞培养物和生物制品的安全性和可靠性,支原体检测变得尤为重要。目前,常用的支原体检测方法包括培养法、PCR(聚合酶链式反应)、荧光染色法和ELISA(酶联免疫吸附试验)法等。这些方法各有其优缺点。
检测方法对比
方法类型 | 灵敏度 | 专属性 | 优点 | 缺点 |
---|---|---|---|---|
培养法 | 高 | 高 | 灵敏度高 | 需要建立 P2 实验室;检测周期长达 28 天;可能存在交叉污染;某些支原体菌株无法培养。 |
指示细胞法 | 高 | 低 | 成本低 | 需要建立 P2 实验室;检测周期长达 7 天;灵敏度低 |
NAT法 | 高 | 取决于引物/探针序列 | 检测周期为 1 天,简单快速;灵敏度高至 0.5 cfu/mL | 可靠性依赖样本质量,交叉污染可能导致假阳性结果。 |
ELISA法 | 中 | 中 | 实验简单、快速 | 依赖于抗体,存在局限性 |
ATP酶法 | 高 | - | 实验简单、快速 | 需要搭配荧光仪器 |
当涉及到产品的放行时,支原体检测应严格遵循药典规定的方法,如培养法或指示细胞法。对于日常检测或研发早期细胞的情况,快速的检测方法,如及时的PCR检测或ATP酶法则可以作为优先选择。
尊龙凯时 开发的支原体PCR检测试剂盒,基于巢式PCR法,能够有效检测多种生物材料中的支原体感染,具有高灵敏度和强专属性。其设计结合了定量PCR技术,适用于细胞培养上清液的直接检测,为实验室研究提供了强有力的支持,确保产品的符合性与安全性。