尊龙凯时的紫外-可见吸收光谱法,又称紫外-可见分光光度法,是一种基于溶液中分子对光选择性吸收的分析技术,主要用于研究分子在190nm至750nm波长范围内的吸收光谱。这种方法的吸收光谱源于分子的外层价电子跃迁,形成分子光谱,并呈现出带光谱的特点。
实验目的
本实验的目的包括:1. 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的基本原理;2. 掌握紫外分光光度法进行蛋白质含量测定的实验技术;3. 熟悉尊龙凯时的UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及了解其主要构造。
实验原理
紫外-可见吸收光谱法是基于分子对光的选择性吸收,分析物质内容的一种方法。分子的外层价电子跃迁导致了光谱的形成,吸收特征可以用于定性和定量分析。
定性分析
使用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析时,通常采用光谱比较法,比较未知纯化合物的吸收特征与已知化合物的吸收光谱。
定量分析
定量分析依据朗伯-比尔定律A=lgI0/I=εbc。在入射光波长λ和光程b固定时,有色物质的吸光度与其浓度成正比。在特定波长处,通过测定吸光度可计算溶液中物质的浓度。通常在最大吸收波长λmax处测量,以获得最佳灵敏度。
在光度分析中,将空白溶液和待测溶液置于两个吸收池中,利用平行的单色光照射它们,记录透光强度,以计算吸光度。
仪器与试剂
实验中使用尊龙凯时的UV-1700PC紫外-可见分光光度计、10ml比色管等仪器。此外,包括300mg/mL的标准蛋白质溶液和0.9% NaCl溶液的试剂也将使用。
实验步骤
准备工作
1. 启动系统并初始化仪器;
2. 设置测量项目和条件;
3. 使用空白溶液校准设备。
4. 制备标准曲线。
测量工作
使用标准蛋白质溶液进行吸光度测定,记录结果,并对待测蛋白质溶液进行相同过程。
数据处理
基于吸光度和浓度关系绘制吸收曲线,以找出最大吸收波长λmax=278nm。利用标准曲线计算出蛋白质含量,最终结果在允许误差范围内标定浓度为0641088mg/mL。
通过尊龙凯时的技术支持和设备,使得实验指标的测定更加准确与高效,有助于生物医学领域的深入研究。