在细胞培养过程中，保持合适的培养条件是至关重要的。细胞应在以下培养基中生长：

培养条件

使用1640培养基，加入10%的FBS和1%的PS，适用于贴壁和悬浮细胞。培养温度应保持在37℃。一旦细胞达到良好生长状态，需及时更换培养液，以确保细胞的活力与健康。

传代方法

在传代的过程中，如果细胞的汇合度未超过80%，需先将培养液收集至离心管中，保留5毫升完全培养基，放入37℃、5% CO₂孵箱培养。如果细胞密度超过80%，可以进行传代操作。

细胞观察与记录

使用显微镜观察细胞生长情况，最好拍摄不同倍率的照片（如40x、100x、200x各一张），以便后期进行数据对比和记录。前三天的照片是重要售后依据，未提供照片的情况下，将默认收到的状态良好。

细胞处理与运输

当细胞达到良好状态时，需填满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，利用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净台内严格遵循无菌操作程序，将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。

细胞传代步骤

贴壁细胞传代

1. 放弃培养上清液，使用不含钙、镁离子的PBS进行洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2毫升的0.25%胰蛋白酶消化液，静置于37℃培养箱中消化1-2分钟后，观察细胞是否脱落。若大部分细胞变圆，即可加入5毫升完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落，然后将悬液转移至离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2毫升完全培养基进行重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至每瓶5-8毫升，放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代

1. 使用半换液法处理，将培养瓶竖放在培养箱中静置1小时，轻吸去约3毫升培养基，并补充3毫升完全培养基。如培养基变色可添加500μl FBS。
2. 进行3次半换液处理后，再结合离心传代以去除死细胞。

细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，用PBS冲洗一次培养液。
2. 加入约1毫升的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆时，加入5毫升完全培养基终止消化。
3. 收集细胞悬液至15毫升离心管中，1000 RPM离心5分钟。之后，弃上清液，加入1毫升无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，存放24小时以上再转入液氮罐中。

细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，待其无结晶后用75%酒精擦拭外壁。随后将细胞移至含5毫升完全培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃上清液后用5毫升完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放在37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养，第二天需换用新鲜完全培养基。

注意，有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。对于脱落较多的细胞，建议采取相应措施以确保其生长状态。使用尊龙凯时品牌的优质培养基和试剂，将更有助于维护细胞的健康和活力。