在生物医疗领域的日常实验操作中，我们时常会遇到一些看似不太健康的细胞状态，如细胞变圆、漂浮、不易贴壁、颜色暗淡、增殖缓慢等。很多科研人员一不小心就可能误认为这些细胞无法继续生长而选择丢弃，然而实际上，很多处于“垂死挣扎”的细胞其实只是暂时的假死状态，是可以被抢救回来的。本文将深入探讨在什么情况下这些看似状态不佳的细胞仍然有可能恢复生机，从而帮助科研人员更加有效地利用珍贵的细胞资源，减少不必要的浪费。

一、细胞变圆、漂浮≠死亡：需区分贴壁状态

许多贴壁细胞，如HeLa、293T及MCF-7，正常情况下应牢牢贴附于培养瓶底。然而，以下情况可能导致其被误认为已死亡：

• 换液或传代操作过于剧烈：机械扰动或胰酶消化时间过长可导致细胞脱附。
• 刚复苏不久：经过冷冻复苏后的细胞一般状态不佳，需要更长时间贴壁（通常为12~24小时）。
• 培养基不适或血清浓度过低：影响细胞的粘附分子表达。

抢救措施包括：静置培养瓶观察24小时以避免频繁晃动；增加血清浓度（如由10%提升至15%）；使用多聚赖氨酸或明胶包被以增强贴壁能力。

二、颜色暗淡、胞浆颗粒增多：可能是应激状态

在显微镜下观察到细胞颜色发暗、胞浆中出现颗粒或空泡，通常被误认为是死亡，但这其实可能是细胞处于应激反应中，例如培养基pH变化、缺氧、营养不足、轻度感染或代谢产物积累等。

抢救措施应包括更换新鲜的培养基，必要时添加Hepes缓冲剂以维持pH；检查是否存在污染；补充胰岛素、转铁蛋白、谷胱甘肽等抗应激因子以支持细胞恢复。

三、增殖迟缓或停滞：可能是休眠而非死亡

细胞状态差可能表现为几天未分裂，尤其是初代培养或敏感类型的细胞（如iPSC类和神经干细胞）。这些细胞可能因为胞内调控机制失衡而陷入休眠状态。

抢救措施：补充细胞因子或小分子化合物（如bFGF、EGF、Y-27632）刺激细胞激活；尝试低密度共培养与健康细胞以增强信号传递；使用培养基优化试剂包如StemFlex、Neurobasal-B27针对性处理。

四、冻存细胞复苏不良：可能是操作不当

冻存细胞复苏后贴壁率低、漂浮明显，甚至看似完全不见，可能是实验操作的问题。

• 复苏后直接离心换液，造成细胞机械损伤。
• 去除DMSO操作不及时，导致细胞长时间暴露于毒性环境。
• 培养基温度不合适，可能导致细胞进入休眠或凋亡。

抢救措施：复苏过程应尽量快（在37℃水浴中<1分钟），直接加入预热的培养基以稀释DMSO，而不必立即离心；添加ROCK抑制剂Y-27632（10μM），可显著提升复苏后贴壁率及存活率，尤其对于ES/iPS细胞效果明显。

五、染色显示“全死”细胞也可能有生机

使用台盼蓝或PI染色判断细胞活性时，阳性反应较多通常被视为死亡，然而这可能仅是细胞膜的暂时性破裂或染色时间过长造成假阳性。

抢救措施包括使用流式细胞术联合AnnexinV/PI染色以分辨凋亡与坏死；继续培养观察细胞是否贴壁与增殖，避免盲目丢弃；考虑再次培养12-24小时以观察是否有恢复的可能。

六、污染不等于报废：部分污染是可以控制的

虽然严重污染如真菌和细菌大量繁殖时应该立即报废，但一些轻度污染或早期污染是可以通过适当处理保住细胞的。

抢救措施包括：对培养瓶表面的霉点进行转瓶并添加抗生素，密切观察；而偶发的颗粒状漂浮物可能是血清蛋白析出或培养基变质，并非污染。

许多细胞状态不佳的情况，其实并非不可挽救。在日常细胞培养中，科研人员不仅要依赖经验，还应具备科学的观察和合理的干预策略。正如尊龙凯时所倡导的，细胞看似无法存活并不代表科研的失败。只要采取正确的措施、及时处理，大多数时候细胞都能重获新生。