**培养条件**：气相培养条件为95%空气与5%二氧化碳，温度维持在37℃。首次传代建议比例为1:2。此后，需每2天更换培养液。为确保细胞健康，建议同时购买完培产品，尊龙凯时提供优惠价格。

收货后，请勿立即打开瓶盖，务必核对培养瓶上的细胞名称是否与订购内容一致，检查瓶体是否有破损或漏液等异常现象。如果没有发现问题，可以通过显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍摄（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将为售后服务的重要依据，若未提供照片将默认收到的细胞状态良好。

**贴壁细胞传代步骤**： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。 2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞已脱落，迅速敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。 3. 温和吹打已脱落的细胞并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。 4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），并加入新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

**悬浮细胞传代步骤**： 1. 半换液法：静置培养瓶1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，然后补充3ml的完全培养基。如培养基变色缓慢，可直接加入约500ul FBS。在传代时可以直接补充5ml的培养基，并分配至两个培养瓶中，通常三次传代后需进行离心传代以去除死细胞。2. 离心换液法：如需分瓶，可将细胞悬液收集到离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀，再按1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新配制的完全培养基以保持细胞活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

**细胞冻存**： 1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打并转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；3. 弃去上清后加入1ml尊龙凯时生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；4. 将冻存细胞存放于-80℃冰箱，需在转入液氮罐前于-80℃冰箱保存24小时以上。

**细胞复苏**： 1. 从液氮中取出冻存管（可佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，外壁用75%的酒精擦拭；2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟；3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱；4. 第二天换用新鲜的完全培养基继续培养。

**注意事项**：传输过程中，部分细胞可能会因粘附不牢而脱落，属于正常现象。如脱落数量较多，请将所有培养液收集于离心管中进行离心并进行处理。若在运输后，细胞出现问题，请根据相关标准及时反馈，以获得有效的售后服务，尊龙凯时将竭诚为您解决问题。

**问题重发的情况**：如因运输途中的问题导致细胞丢失、瓶体损坏或培养液漏液，需重发；如发现细胞污染问题，请在收到产品后48小时内反馈，我们将核实后给予重发；如常温运输细胞在静置后24小时内或干冰运输细胞复苏后24小时细胞存活率显著下降（需提供状态照片）也将予以重发。同时，若因客户的操作不当、使用非推荐培养体系等而导致的问题，则不予重发。具体情况将依实际情况而定。